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   食品大肠菌群快速检验纸片     

 

1、原理及适用范围
       将乳糖胆盐选择性培养基和TTC显色剂加载在纸片上,经培养后能够在纸片上生长并发酵乳糖产酸的即为大肠菌群阳性,记录每个稀释度大肠菌群阳性纸片数,根据大肠菌群MPN表查出相应的大肠菌群数。 食品大肠菌群检验纸片法与国标法中的九管法相对应,将原来几步的试验简化为一步,时间由78h缩短为24h以内,省去了制备培养基、消毒和培养器皿的清洗处理等大量辅助性工作,随时可以打开包装进行抽样检测。 执行标准:食品安全国家标准 食品微生物检验大肠菌群计数MPN计数法(GB/T 4789.3--2010)。
       适用于各类食品、饮料等样品中大肠菌群的快速测定。
2、操作方法
       2.1、样品处理:按无菌操作称取样品25g(或25mL)放入含有225mL灭菌磷酸缓冲液稀释液(或生理盐水)的取样瓶或均质杯中,经充分振摇做成1:10的样品匀液。样品匀液的pH值应在6.5~7.5之间,必要时用1mol/L氢氧化钠或1mol/L盐酸调节。用1mL灭菌吸管吸取1:10样品匀液,注入含有9mL稀释液的试管内,振摇试管制成1:100的样品匀液。根据对样品污染状况的估计,按上述操作,一次制成10倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释1次,换一支1mL无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕,全过程不得超过15min。
       2.2、接种
         2.2.1、选取两个稀释度进行接种,普通食品一般采用1:10和1:100这两个稀释度,饮料采用原液和1:10两个稀释度。本品每份由三片大纸片(接10mL,袋中二片叠放算作一大片),六片小纸片(接1mL)组成。
         2.2.2、用灭菌吸管吸取10mL 1:10样品匀液加到含有大纸片的塑料袋中(相当于接样品1g),吸透后平放,做三个重复。再用1mL灭菌吸管吸取1mL同一稀释度的样品匀液加到含有小纸片的塑料袋中(相当于接样品0.1g),做三个重复。再另取一支1mL灭菌吸管吸取1mL 1:100样品匀液加到含有小纸片的塑料袋中(相当于接样品0.01g),做三个重复。
       2.3、培养:将接种好的纸片(可叠放)放入36℃±1℃培养箱中培养15~24h。

 

检测结果图例:

 


3、大肠菌群最可能数(MPN)的报告
       3.1 若纸片变黄或在黄色背景上呈现红色斑点为大肠菌群阳性纸片。纸片保持紫蓝色不变或在紫蓝色背景上呈现红色斑点,但周围没有黄色均为大肠菌群阴性纸片。
        3.2 记录每个稀释度大肠菌群阳性纸片数,根据《食品饮料大肠菌群MPN表》查出相应的大肠菌群数。
        3.3 如接种的第一个梯度为原液,应将表上查出的结果除以10。
4、注意事项
         新的国家标准所用的单位改为每克(或毫升)检样中大肠菌群最可能数,标准的接种量为0.333g(mL),MPN表也是由此而设计。而使用本品的标准接种量为3.33g(mL),大纸片接种10mL 1:10样品匀液相当于1g样品,因而表内数字应相应降低10倍。饮料样品的接种量为33.3mL,大纸片接种10mL样品原液,表内数字应降低100倍。

附表     食品、饮料大肠菌群(MPN)检索表

阳性纸片数

MPN
100mL(g)

95%可信限

1 mL(g)×3

0.1 mL(g)×3

0.01 mL(g)×3

下限

上限

0
0
0
0

0
0
0
0

0
1
2
3

<30
30
60
90

<5

90

0
0
0
0

1
1
1
1

0
1
2
3

30
60
90
120

<5

130

0
0
0
0

2
2
2
2

0
1
2
3

60
90
120
160

 

 

0
0
0
0

3
3
3
3

0
1
2
3

90
130
160
190

 

 

1
1
1
1

0
0
0
0

0
1
2
3

40
70
110
150

<5
10

200
210

1
1
1
1

1
1
1
1

0
1
2
3

70
110
150
190

10
30

230
360

1
1
1
1

2
2
2
2

0
1
2
3

110
150
200
240

30

360

1
1
1
1

3
3
3
3

0
1
2
3

160
200
240
290

 

 

2
2
2
2

0
0
0
0

0
1
2
3

90
140
200
260

10
30

360
370

2
2
2
2

1
1
1
1

0
1
2
3

150
200
270
340

30
70

440
890

2
2
2
2

2
2
2
2

0
1
2
3

210
280
350
420

40
100

470
1500

2
2
2
2

3
3
3
3

0
1
2
3

290
360
440
530

 

 

3
3
3
3

0
0
0
0

0
1
2
3

230
390
640
950

40
70
150

1200
1300
3800

3
3
3
3

1
1
1
1

0
1
2
3

430
750
1200
1600

70
140
300

2100
2300
3800

3
3
3
3

2
2
2
2

0
1
2
3

930
1500
2100
2900

150
300
350

3800
4400
4700

3
3
3
3

3
3
3
3

0
1
2
3

2400
4600
11000
≥24000

360
710
1500

13000
24000
48000

5、保存条件
      本产品需存放在4℃~10℃冰箱中,保质期为一年,铝箔袋打开后,未用完的纸片要放回铝箔袋中封好,放到冰箱中,一个月内用完。在高湿度的环境中可能出现冷凝水,最好在拆封前将整包回温至室温.

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